手持式ATP仪实时荧光定量PCR仪核酸提取仪PCR基因扩增仪PCR基因扩增仪加热型干式金属浴恒温器

当前位置:首页 >产品展示 >试剂耗材>定量PCR试剂类

  • 型号 :
  • 价格 : ¥0.00
  • 发布时间: 2014-01-22
H7N9禽流感病毒核酸荧光PCR检测试剂盒

Avian influenza virus (H7N9) Real Time RT-PCR Kit

【产品名称】
通用名称:禽流感病毒H7N9核酸测定试剂盒
英文名称:Avian influenza virus (H7N9) Real Time RT-PCR Kit

【包装规格】20T/盒

【原理及预期用途】本试剂盒针对甲型H7N9流感病毒保守基因片段设计特异性引物及Taqman探针,采用实时荧光PCR法通过对样本中禽流感病毒H7N9 RNA核酸的全封闭式扩增,实现可疑样本H7N9型流感病毒的病原学检测诊断。

【试剂盒主要组成成份】
1、EX-RNA磁珠法核酸提取试剂
2、核酸扩增试剂盒:

 序号 组分  规格
 
 1  RT-PCR检测混合液  410ul×1
 2  RT-PCR酶混合液  33ul×1
 3  H7荧光探针   85ul×1
 4  N9荧光探针  85ul×1
 5  阴性对照  100ul×1
 6    N9阳性对照品(非感
染性体外转录RNA)
100ul×1

自备试剂:95%乙醇;异丙醇。

【储存条件和有效期】 试剂盒应在-20℃及以下温度避光保存,有效期6个月。核酸扩增试剂盒反复冻融不宜超过3次,使用前应在室温下完全融化,并充分振荡混匀后轻微离心。

【适用仪器】 本试剂盒适用于TL988,ABI7000,ABI7300,ABI7500,ABI7900,MJ-chromo4,MX3000P,MX3005P,SmartCyclerⅡ,Rotor-Gene6000,Lightcycler R480,iCycleriQ4,iCycleriQ5,Bio-Rad CFX96,SLAN等多色荧光PCR仪及相应软件。

【标本要求】
人体鼻腔或咽部分泌物:用无菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物,将分泌物或咽拭子置入无菌玻璃管(含0.4ml灭菌生理盐水),用无菌棉球将试管塞紧后,密闭送检。标本可立即用于检测,也可保存于-20℃待测。

【检验方法】
1.标本、对照品的核酸裂解处理
用已取得医疗器械许可证的商品化的EX-RNA磁珠法核酸提取试剂盒处理标本,具体操作参见该试剂盒说明书。
2.试剂配制
从试剂盒中取出RT-PCR检测混合液、RT-PCR酶混合液、H7荧光探针和N9荧光探针,在室温下融化并振荡混匀简短离心。
每个测试反应体系配制如下:

 试剂  RT-PCR检测混合液 酶混合液  H7荧光探针
 
 用量(ul)   10  0.8  4.2
 试剂  RT-PCR主反应液 酶混合液  N9荧光探针
 用量(ul)   10  0.8  4.2

两组反应液分别计算好各试剂使用量,加入一适当体积离心管中,充分混匀,简短离心,向设定的n个(n=样本数+1管阳性对照+1管阴性对照)PCR反应管中分别加入15ul,转移至样本处理区。
3.加样
取上述H7混合液和N9混合液反应管,然后将样品核酸提取物、阴性对照(DEPC-H2O)或阳性对照品(N9)各5ul分别加入PCR管中,盖好管盖,立即进行PCR扩增反应。
4.循环参数设置:


 1cycle  42℃  10min
 95℃  20s
 40cycles  95℃  10s
 58℃  40s 

    注意:配制反应体系的离心管应为无RNA酶污染;“*”为收集荧光信号步骤(通道为FAM,吸收波长490nm,发射光波长525nm)

5.结果分析条件设置:
阈值设定原则以阈值线刚好超过阴性对照的最高点。阴性对照≥40,阳性对照≤35,否则实验视为无效。 
6.试验结果的判断
1. 检测样本的H7 RT-PCR反应体系和N9 RT-PCR反应体系扩增曲线Ct值均无数据时,判为H7N9阴性。
2. 检测样本的H7 RT-PCR反应体系和N9 RT-PCR反应体系扩增曲线Ct均小于等于38.0时,判为H7N9阳性。
3. 检测样本的H7 RT-PCR反应体系和N9 RT-PCR反应体系扩增曲线在38 4. 检测样本的H7 RT-PCR反应体系和N9 RT-PCR反应体系仅其中之一的扩增曲线为阳性,建议重做,重做结果若两者均为阳性,则判定为H7N9阳性;两者结果仍为H7(N9)阳性,则判定为H7N9阴性,建议通过其他方法进一步确认。

【对检验结果的解释】实验室环境污染,试剂污染,样品交叉污染会出现假阳性结果;试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果。

【检验方法的局限性】当检测样本中被检核酸浓度含量低于最低检测限1×103copies/ml时可能会发生假阴性的结果,检测结果不能直接作为临床确诊或排除病例的依据,仅供临床医生参考使用。

【产品灵敏度】最低检测限:1.0×103copies/ml;

【注意事项】 开始检测前请仔细阅读本说明书全文。
1.整个检测过程应严格分在三区进行:PCR反应体系的配制区;标本处理、加样区;PCR扩增、荧光检测及结果分析区。各区使用的仪器、设备、耗材和工作服应独立专用。实验后即请清洁工作台,并进行消毒。
2.使用不含荧光物质的一次性手套(经常替换) 、一次性专用离心管、自卸式移液器和带滤嘴吸头。
3.试剂准备和标本处理应使用超净工作台(负压式)或防污染罩,以防止对环境污染。
4.每次实验应设置阴、阳性对照品。
5.操作人员应经过专业培训,具有一定经验和操作技能。
6.操作台、移液器、离心机、PCR扩增仪等仪器设备应经常用10%次氯酸或75%酒精、紫外线灯或臭氧消毒处理。
7.实验中接触过标准品和对照品的废弃物品(如吸头)、扩增完毕的离心管、标本等应进行无害化处理后方可丢弃。
8.试剂使用前应在常温下充分融化并混匀。
9. PCR反应混合液应避光保存。
10.反应管中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧。
11.不同批号的试剂请勿混用,请在有效期内使用试剂盒。
(此内容由medtl.agxa.cn提供)